2
1 FGBU „Poliklinika č. 1“ Ministerstva vnútra Ruskej federácie, Moskva; Národná zdravotná inštitúcia „Cestná klinická nemocnica pomenovaná po N.A. Semashko, Moskva; GBOU VO „Prvá Moskovská štátna lekárska univerzita pomenovaná po I.I. ONI. Sechenov“ Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie; FGAOU VO "Univerzita RUDN", Moskva
2 Národná zdravotnícka inštitúcia „Cestná klinická nemocnica pomenovaná po N.A. Semashko, Moskva
3 Národná zdravotnícka inštitúcia „Cestná klinická nemocnica pomenovaná po N.A. Semashko, Moskva; GBOU VO „Prvá Moskovská štátna lekárska univerzita pomenovaná po I.I. ONI. Sechenov" Ministerstvo zdravotníctva Ruskej federácie
Mužský faktor sa vyskytuje v polovici prípadov neplodných manželstiev. V súčasnosti sa za najčastejšiu príčinu mužskej neplodnosti – 35 – 40 % prípadov – považuje idiopatická oligo-, asteno- alebo teratozoospermia, kedy sú pozorované poruchy kvantitatívnych a kvalitatívnych parametrov spermií pri absencii anamnestických rizikových faktorov, absencia porušení výsledkov lekárskeho vyšetrenia a hormonálnych štúdií. Antioxidanty sú populárne lieky na liečbu mužskej neplodnosti. Údaje o ich účinnosti sú však protichodné.
Účel štúdie: ukázať možnosti domáceho biologicky aktívneho komplexu AndroDoz® na liečbu idiopatickej mužskej neplodnosti.
Materiál a metódy:Štúdie sa zúčastnilo 30 mužov z neplodných párov vo veku 25-45 rokov. Štúdia ejakulátu bola vykonaná v súlade s odporúčaniami WHO. Stanovil sa obsah reaktívnych foriem kyslíka v natívnom ejakuláte a premytých spermiách. Poškodenie chromozómov spermií bolo charakterizované fragmentáciou DNA, hodnotenou metódou chromatínovej disperzie v agarózovom géli. Analýza ejakulátu bola vykonaná pred a počas liečby AndroDoz® perorálne, 4 kapsuly denne (2 ráno a 2 večer).
Výsledky: po 1,5 mesiaci liečbe 2/3 pacientov vykazovali zníženie percenta a stupňa fragmentácie DNA v priemere o 5, respektíve 10 % (p<0,01); уменьшилась выраженность оксидативного стресса в 70% случаев в среднем по группе более чем в 2 раза (p<0,05). Показатели стандартной спермограммы при этом не менялись.
Zistenia: AndroDoz® sa môže použiť pri liečbe idiopatickej mužskej neplodnosti so známkami oxidačného stresu a narušenou integritou DNA spermií; asi 2/3 pacientov reagujú na túto terapiu pozitívnymi zmenami v kvalite spermií.
Kľúčové slová: mužská neplodnosť, oxidačný stres, fragmentácia DNA, antioxidanty.
Pre citáciu: Bozhedomov V.A., Lipatova N.A., Bozhedomova G.E., Shcherbakova E.V., Komarina R.A. Použitie komplexu živín na liečbu mužskej neplodnosti // BC. 2016. Číslo 23. S. 1546-1552
Potravinová prísada pre mužskú neplodnosť
Božedomov V.A. 1−4 , Lipátová N.A. 2, Božedomová G.E. 2,3, Shcherbakova E.V. 2, Komarina R.A. 2
1
Ambulancia č. 1 ministerstva pre prezidentské záležitosti v Moskve
2
N.A. Klinická nemocnica Semashko Road, Moskva
3
.M Sechenov Prvá Moskovská štátna lekárska univerzita
4
Univerzita priateľstva národov Ruska, Moskva
Polovica prípadov neplodných manželstiev má na svedomí mužskú neplodnosť. Najčastejšími príčinami (35-40 %) mužskej neplodnosti sú idiopatická oligospermia, astenospermia a/alebo teratospermia. V týchto prípadoch abnormálne množstvo a kvalita spermií nesúvisí s anamnestickými rizikovými faktormi, abnormálnymi lekárskymi vyšetreniami alebo hormonálnou nerovnováhou. Antioxidanty sú populárne prostriedky na mužskú neplodnosť, avšak ich účinnosť je kontroverzná.
cieľ. Analyzovať účinnosť domácej bioaktívnej prísady AndroDoz® na idiopatickú mužskú neplodnosť.
Pacienti a metódy. Zaradených bolo 30 mužov z neplodných párov vo veku 25–45 rokov. Ejakulát bol vyšetrený podľa odporúčaní WHO (vrátane merania ROS v natívnom ejakuláte a premytých spermiách). Chromozomálne aberácie v spermiách boli hodnotené fragmentáciou DNA vyhodnotenou testom disperzie chromatínu v spermiách. Ejakulát bol testovaný pred a v priebehu liečby (orálne AndroDoz® 2 kapsuly dvakrát denne).
výsledky. Po 1,5 mesiaci sa percento a stupeň fragmentácie DNA znížilo o 5 % a 10 % u dvoch tretín pacientov (p<0.01). The severity of oxidative stress decreased more than twice in 70% of the patients (p<0.05). Standard spermogram parameters remained unchanged.
Závery. AndroDoz® možno odporučiť pri idiopatickej mužskej neplodnosti s oxidačným stresom a zmenenou integritou DNA spermií. Dve tretiny pacientov reagujú na túto liečbu a preukazujú zlepšenie kvality spermií.
Kľúčové slová: mužská neplodnosť, oxidačný stres, fragmentácia DNA, antioxidanty.
Pre citáciu: Bozhedomov V.A., Lipatova N.A., Bozhedomova G.E. a kol. Potravinová prísada pre mužskú neplodnosť // RMJ. 2016. Číslo 23. S.1546–1552.
Článok pojednáva o využití komplexu živín na liečbu mužskej neplodnosti
Úvod
Mužský faktor sa vyskytuje v polovici prípadov neplodných manželstiev. V súčasnosti sa za najčastejšiu príčinu mužskej neplodnosti – 35 – 40 % prípadov – považuje idiopatická oligo-, asteno- alebo teratozoospermia, kedy sú pozorované poruchy kvantitatívnych a kvalitatívnych parametrov spermií pri absencii anamnestických rizikových faktorov, absencia porušení výsledkov lekárskeho vyšetrenia a hormonálnych štúdií.V takýchto prípadoch sa testovalo veľké množstvo rôznych liekov na zlepšenie kvality spermií. V posledných rokoch sa aktívne využívajú antioxidanty, čo sú prírodné alebo syntetické biomolekuly, ktoré zabraňujú poškodeniu buniek v dôsledku oxidačného stresu (OS) spôsobeného pôsobením nadmerného množstva reaktívnych foriem kyslíka (ROS). Antioxidanty zahŕňajú vitamíny E, C, A, karnitíny, zinok, selén, rastlinné extrakty a niektoré ďalšie liečivá a látky. Niekoľko randomizovaných klinických štúdií preukázalo možnosť použitia antioxidačných doplnkov na liečbu mužskej subfertility. Podľa výsledkov metaanalýz M.G. Showell a kol. antioxidanty zlepšujú životaschopnosť, koncentráciu a progresívnu pohyblivosť, väzbu na vajíčko, znižujú fragmentáciu DNA spermií, zvyšujú percento tehotenstiev s prirodzeným počatím a programy asistovanej reprodukcie. Ale charakterizujúc kvalitu štúdií zahrnutých do analýzy autori prehľadu poznamenávajú, že úroveň dôkazov je „nízka“ a „veľmi nízka“. Autori dospeli k záveru: "Antioxidanty mohli byť účinné pri liečbe subfertilných mužov, ale prezentácia výsledkov štúdie bola príliš nekonzistentná na to, aby sme si boli týmito výsledkami istí." Podľa E.G. Hughes a kol. , kombinácia antioxidantov je účinnejšia: pravdepodobnosť spontánneho tehotenstva sa zvyšuje 4,2-krát (95% CI 2,7-6,6), narodenie detí - 4,9-krát (95% CI 1,9-12,2). Nízka cena a relatívne nízke riziko toxicity antioxidantov sú atraktívne pre pacientov a lekárov, a preto ich odporúča Európska urologická asociácia (EAU) na liečbu mužskej neplodnosti, ale ako zdôrazňujú najnovšie smernice EAU, nie pre idiopatické formy.
Účel tejto štúdie: ukázať možnosti domáceho biologicky aktívneho komplexu AndroDoz® na liečbu idiopatickej mužskej neplodnosti. AndroDoz® je dodatočným zdrojom L-karnozínu, karnitínu, koenzýmu Q10, kyseliny glycyrizínovej, selénu, zinku, vitamínov E a A.
materiál a metódy
Štúdia prebiehala od februára do júla 2016. Zapojilo sa do nej 30 mužov z neplodných párov vo veku 25-45 rokov. Kritériá na zaradenie do štúdie boli:žiadne tehotenstvo v manželstve dlhšie ako 12 mesiacov. sexuálny život bez antikoncepcie;
prítomnosť spermií v ejakuláte;
idiopatická oligo-, asteno- alebo teratozoospermia;
absencia infekcií reprodukčného traktu (Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Trichomonas vaginalis) diagnostikovaných polymerázovou reťazovou reakciou;
absencia klinických a laboratórnych príznakov zápalového procesu ďalších gonád;
absencia výrazných autoimunitných reakcií proti spermiám, keď antispermové protilátky (ASAT) nepokrývajú viac ako desatinu pohyblivých gamét (MAR IgG<10%);
žiadna hmatateľná varikokéla;
absencia závažnej somatickej patológie;
absencia psychosexuálnych a ejakulačných dysfunkcií.
Kritériá vylúčenia boli:
preukázané genetické príčiny neplodnosti (Klinefelterov syndróm, mikrodelécie AZF, CFTR);
azoospermia;
pyospermia;
nadmerná produkcia folikuly stimulujúceho hormónu;
hmatateľná varikokéla potvrdená ultrazvukom;
prítomnosť imunitného faktora neplodnosti (MAR IgG> 10 %);
ťažká somatická patológia;
psychosexuálne a ejakulačné dysfunkcie.
Štúdium ejakulátu sa uskutočnilo v súlade s požiadavkami WHO: stanovila sa koncentrácia, pohyblivosť a podiel normálnych foriem, počet progresívne mobilných spermií v ejakuláte a integrálny index kvality spermií (objem ejakulátu × koncentrácia spermií × pomer progresívne mobilných foriem × podiel normálnych foriem). Percento pohyblivých spermií potiahnutých ACAT sa stanovilo metódou zmiešanej aglutinačnej reakcie (SpermMar Kit, FertiPro, Belgicko). OS sa stanovilo stanovením intenzity procesov voľných radikálov chemiluminiscenciou závislou od luminolu s použitím luminometra LKB-Wallac 1256 (Fínsko) a chemiluminometra-003 (Rusko). Intenzita chemiluminiscencie sa posudzovala podľa súčtu svetla a maximálnej amplitúdy luminiscencie, ktorá zodpovedala rýchlosti tvorby ROS. ROS boli stanovené v natívnom ejakuláte a premytých spermiách v súlade s protokolom opísaným v usmerneniach WHO. Poškodenie chromozómov spermií bolo charakterizované fragmentáciou DNA hodnotenou metódou chromatínovej disperzie (Halosperm®; Halotech DNA, Španielsko) v inertnom agarózovom géli s vizuálnym hodnotením pod mikroskopom tvorby halo efektu po kyslej denaturácii DNA a lýze jadrových proteínov. V súlade s odporúčaniami výrobcu testovacieho systému bolo na 5-bodovej škále hodnotené percento spermií so známkami apoptózy a stupeň narušenia tvorby halo.
Analýza ejakulátu bola vykonaná pred a počas liečby AndroDoz® perorálne, 4 kapsuly denne (2 ráno a 2 večer). Účinky tejto drogy na mužov už popísali viaceré domáce publikácie. Zvláštnosťou našej štúdie bolo posúdiť nielen ukazovatele štandardného spermogramu, ale aj tvorbu ROS a stav chromatínu, ktorý býva pri OS často narušený.
Empirické údaje boli spracované pomocou programu Statistica (StatSoft, USA). Priemerné hodnoty pre skupiny boli prezentované ako M±SD, medián, 25-75% percentily, rozsah „hodnoty na zajatie“. Na poli Box-and-Whisker boli „odľahlé hodnoty“ body, ktoré boli ďaleko od distribučného centra a neboli preň typické (možno ide o výsledky chýb pozorovania alebo odľahlých hodnôt). Významnosť rozdielov medzi skupinami bola testovaná pomocou Studentovho t-testu pre párovo súvisiace varianty (t), znaky (Z), Wilcoxon (W); rozdiely boli považované za významné u p<0,05.
Uvádzame údaje o účinkoch pozorovaných v počiatočných štádiách (1,5 mesiaca) liečby.
výsledky
Priemerný vek pacientov zahrnutých do štúdie bol 34,0±6,95 rokov. Primárna neplodnosť bola u 18 osôb (59 %), priemerná dĺžka trvania neplodnosti v súbore bola 28,9±15,9 mesiacov.Hlavnými ukazovateľmi spermogramu sú objem ejakulátu, koncentrácia, percento progresívne pohyblivých a morfologicky normálnych spermií po 1,5 mesiaci. liečba neprešla významnými zmenami (tabuľka 1). V súlade s tým sa nezmenili ani integrálne vypočítané hodnoty: počet progresívne pohyblivých spermií v ejakuláte a index kvality spermií (pozri tabuľku 1; p>0,05). Zároveň bol zaznamenaný štatisticky významný pokles percenta spermií so zmiešanou patológiou: v absolútnom vyjadrení 8 % pre priemer skupiny a 11 % pre medián (obr. 1; p<0,01); положительная динамика данного показателя имела место у 80% пациентов (p<0,01).
Po 1,5 mesiaci. liečení sa pozoroval významný pokles poškodenia DNA spermií (tabuľka 2; obr. 2). Percento spermií s fragmentáciou DNA v absolútnych hodnotách sa v skupine znížilo v priemere o 4%, medián - o 5% (v porovnaní s počiatočnou úrovňou -23% pre priemer, p<0,01 и −28% для медианы, р=0,01); меньше стала степень выраженности таких нарушений, оцениваемых по степени дисперсии хроматина (−10% для средней, p<0,05 и −12% для медианы, p<0,01). Положительная динамика фрагментации ДНК на фоне лечения имела место у 67% мужчин (p>0,05).
Počas liečby sa závažnosť OS štatisticky významne znížila, o čom svedčí zníženie produkcie ROS premytými spermiami v 70 % prípadov (tabuľka 3; p<0,05) в среднем по группе более чем в 2 раза; изменения медианы были еще более наглядны – −82% (рис. 3; p<0,05). При этом продукция АФК в нативном эякуляте изменялась статистически несущественно и даже имела тенденцию к повышению (см. табл. 3; p>0,05).
Diskusia
Antioxidanty sú podľa rôznych publikácií obľúbené lieky na liečbu porúch kvality spermií. Rôzne farmaceutické spoločnosti ponúkajú hotové komplexy živín, ktoré podľa výrobcov dokážu zlepšiť mužskú plodnosť. Naše údaje potvrdili pozitívny účinok domáceho komplexu AndroDoz® na mužskú neplodnosť súvisiacu s OS. Produkcia ROS premytými spermiami sa podľa našej štúdie znížila v priemere 2–5 krát v porovnaní s počiatočnou úrovňou. Závažnosť intracelulárneho OS, hodnotená produkciou ROS premytými spermiami, je obzvlášť dôležitá, pretože tesná blízkosť medzi spermatogénnymi voľnými radikálmi a DNA spermií určuje ich najväčšiu úlohu pri poruchách plodnosti.Súčasne došlo k zníženiu percenta spermií s fragmentáciou DNA a závažnosti takýchto porúch chromatínu. Pokles indexu fragmentácie bol v absolútnom vyjadrení v priemere 4 – 5 %, čo je takmer štvrtina pôvodnej úrovne. Keďže vzťah medzi množstvom ROS v spermiách, závažnosťou OS spermií a fragmentáciou DNA uznáva väčšina odborníkov, tieto výsledky našej štúdie sa zdajú celkom logické.
Zároveň sa zistilo, že pozitívna dynamika tvorby ROS a fragmentácie DNA počas liečby sa vyskytla len v 2/3 prípadov. Zároveň zlepšenie týchto ukazovateľov nebolo vždy pozorované pri vysokých úrovniach OS a fragmentácie DNA a naopak. Zostáva nám nejasné, prečo sa závažnosť intracelulárneho OS znížila, ako bolo hodnotené produkciou ROS premytými spermiami, ale produkcia ROS v natívnom ejakuláte sa nezmenila, pretože antioxidanty by mali mať v oboch prípadoch chemicky viazané aktívne radikály. Keďže táto štúdia zahŕňala pacientov bez známok infekčného a zápalového procesu, účinok je ťažké vysvetliť vplyvom leukocytov spermií. Objasnenie týchto vzorcov by malo byť predmetom ďalšieho výskumu.
Naše údaje zároveň ukázali, že štandardné ukazovatele spermogramu - objem, koncentrácia, pohyblivosť a morfológia spermií - sa počas liečby významne nezmenili, zatiaľ čo podľa A.A. Kamalová a spol. , dochádza k zvýšeniu parametrov spermiogramu v 87,6 %, podľa M.K. Alchinbaeva a kol. - v 92% prípadov. E.S. Dendeberov a kol. napíšte, že užívanie AndroDose po 3 mes. viedlo k zvýšeniu objemu ejakulátu o 45,7 %, koncentrácie spermií o 18,5 %, celkovej pohyblivosti o 33,7 %, aktívnej pohyblivosti o 38,4 % a počtu morfologicky normálnych foriem o 50 %. Údaje od A.A. Proskurin a kol. ešte optimistickejšie: zvýšenie objemu o 1,95-násobok, pohyblivosť o 7,43-násobok, koncentrácia o 1,53-násobok a percento normálnych foriem o 6,75-násobok oproti východiskovým hodnotám. Takéto údaje sú však otázne: doteraz neexistujú žiadne liečebné postupy, ktoré by mohli zvýšiť podiel normálnych foriem o 50 – 675 %.
Absencia výrazného zlepšenia parametrov štandardného spermogramu v našej štúdii (s výnimkou poklesu percenta spermií so zmiešanou patológiou, pozitívny trend v tomto ukazovateli sa vyskytol v 80 % prípadov), môže byť spôsobená skutočnosť, že doba pozorovania bola len 1,5 mesiaca, zatiaľ čo dĺžka cyklu spermatogenézy vrátane doby prechodu príveskom je asi 3 mesiace. Možno, že pri dlhšom používaní lieku môže dôjsť k zlepšeniu iných ukazovateľov štandardného spermogramu. Je tiež zrejmé, že dôležité sú počiatočné ukazovatele spermogramu: stupeň oligo-, asténo- a teratozoospermie a ich kombinácie. Objasnenie možností lieku v liečbe rôznych foriem patozoospermie bude predmetom diskusie v nasledujúcich publikáciách.
Záver, že použitie komerčných vitamínových a antioxidačných komplexov nevedie vždy k výraznému zlepšeniu parametrov štandardného spermogramu, je v súlade s údajmi množstva zahraničných kontrolovaných štúdií. Vymenovanie komplexu antioxidantov teda ukázalo zlepšenie motility spermií iba v 3 zo 6 takýchto štúdií, koncentrácia sa zvýšila iba v 1 zo 6.
Je možné, že účinnosť jedného alebo druhého antioxidačného liečiva závisí od jeho kvalitatívneho a kvantitatívneho zloženia. Efektívne dávky monopreparátov antioxidantov sú podľa množstva recenzií: vitamín E> 300 mg/deň, vitamín C> 1000 mg/deň, karnitíny (L- a acetyl-)> 3000 mg/deň, selén - 100− 225 mcg/deň , koenzým Q10 - 60-200 mg / deň, zinok (ZnSO4) - 66-400 mg / deň, glutatión - 600 mg / deň, čo výrazne prekračuje stanovené denné horné prípustné hladiny príjmu týchto látok a zvyšuje ich dlhodobé používanie nie je bezpečné. Nevyvážené antioxidačné komplexy môžu spôsobiť nadmernú elimináciu voľných kyslíkových radikálov nevyhnutných pre normálny priebeh akrozomálnej reakcie a kapacity spermií a vyvolať regeneračný stres ako rebound efekt. Existujú dôkazy, že pri nadbytku antioxidantov dochádza k zvýšeniu dekondenzácie jadrového chromatínu spermií o viac ako 20 %, čo podľa F. Absalana, Y. Meneza a kol. vedie k obvyklému potratu. Zmeny v štruktúre chromatínu môžu spôsobiť zmeny v génovej expresii a ovplyvniť proces implantácie v dôsledku asynchrónnej kondenzácie chromozómov, ako aj prítomnosti cytoplazmatických fragmentov v embryu. Zistilo sa, že dlhodobé používanie takého známeho antioxidantu, akým je kyselina askorbová, alebo jej vysoké dávky, majú veľmi nejednoznačný význam pre stimuláciu spermatogenézy. Vitamín C pri hyperdávkach ničí disulfidové väzby proteínov, prispieva k ich denaturácii, čo vedie k oxidácii membrán v I. a III. fáze spermatogenézy a nesprávnemu zabaleniu DNA.
Kompromisom sú preto často komerčne dostupné prípravky, kde nízke (na fyziologickú úroveň bezpečné na použitie) dávky antioxidantov sú kompenzované širokým spektrom účinných látok v nádeji na ich synergiu.
Napriek všetkým výhodám antioxidačnej terapie by sa teda táto skupina liekov mala predpisovať s určitou opatrnosťou, pričom by sa mali vyberať vyvážené lieky s dobrou dôkazovou základňou.
Okrem toho môžu byť antioxidanty účinné len v prípade nadbytku ROS a vzniku OS. Keďže OS nie je vždy príčinou zhoršenia kvality spermií - v 30-80% prípadov, podľa M.G. Showell a kol. , a asi 40% podľa našich údajov, - vymenovanie antioxidantov na liečbu mužskej neplodnosti sa zdá byť opodstatnené iba pre tieto prípady.
Je zrejmé, že EAU Guidelines tiež neodporúča predpisovať antioxidanty všetkým mužom s idiopatickou neplodnosťou za sebou. V súčasnosti existujú presvedčivé údaje o účinnosti perorálnych antioxidantov u mužov len pri príprave páru na následné mimotelové oplodnenie, pričom úlohu antioxidantov v procese prirodzeného počatia treba ešte ďalej skúmať.
Na základe najnovšej Cochranovej recenzie M.G. Showell a kol. , vrátane 48 štúdií porovnávajúcich jednotlivé a kombinované antioxidanty s placebom, bez liečby alebo s iným antioxidantom v populácii 4 179 subfertilných mužov sa zdá, že antioxidanty sú stále účinné ako predkoncepčná liečba u subfertilných mužov. Očakávaná klinická miera tehotenstva u subfertilných mužov, ktorí neužívali žiadne antioxidanty, bola 6 zo 100 v porovnaní s 11 až 28 zo 100 mužov užívajúcich antioxidanty. Výsledky prieskumu tiež ukázali, že očakávaná živá pôrodnosť u subfertilných mužov v skupine s placebom alebo bez liečby je 5 zo 100 v porovnaní s 10 až 31 zo 100 u mužov užívajúcich antioxidanty.
Preukázali sme teda, že užívanie domáceho AndroDoz® komplexu v dávke 4 kapsuly denne po 1,5 mesiaci. liečba vedie k zlepšeniu kvality spermií - výraznému zníženiu percenta spermií so zmiešanou patológiou a / alebo fragmentáciou DNA na pozadí zníženia produkcie ROS premytými spermiami, čo je spojené s poklesom závažnosť mužského operačného systému gamét.
Integrita mužskej DNA je životne dôležitá pre interakciu spermií a vajíčok, oplodnenie a skorý embryonálny vývoj, a preto sú získané výsledky nepochybne praktické.
zistenia
1. AndroDoz® sa môže použiť pri liečbe idiopatickej mužskej neplodnosti so známkami OS a porušením integrity DNA spermií; asi 2/3 pacientov reagujú na túto terapiu pozitívnymi zmenami v kvalite spermií.2. Na pozadí tejto liečby produkcia ROS premytými spermiami štatisticky významne klesá, čo naznačuje zníženie závažnosti OS u mužských gamét.
3. Na pozadí tejto liečby dochádza k výraznému zlepšeniu štruktúry DNA spermií u 67 % mužov.
4. Štatisticky významný pokles percenta spermií so zmiešanou patológiou v spermograme bol zaznamenaný v 80 % prípadov.
5. Na 1,5 mesiaca. liečbe AndroDoz® nedošlo k signifikantnému zlepšeniu ostatných parametrov spermiogramu (objem, koncentrácia, podiel progresívne mobilných a morfologicky normálnych foriem), zmeny v týchto parametroch boli viacsmerné.
6. Významným obmedzením štúdie bola absencia kontrolnej skupiny, krátke trvanie sledovania a chýbajúce zohľadnenie tehotenstiev. Preto je potrebný ďalší výskum.
Literatúra
1. Príručka WHO pre štandardizované vyšetrovanie, diagnostiku a manažment neplodných mužov. Cambridge: Cambridge University Press, 2000; 91.
2. Andrológia: Mužské reprodukčné zdravie a dysfunkcia. 3. E.Nieschlag., H.M. Behre, S. Nieschlag (Ed.), 2010; 629.
3. Mužská neplodnosť / S.J. Parekattil, A. Agarwal (Ed.), 2012, Springer; 518.
4. Jungwirth A. (ed.), Diemer T., Dohle G.R. a kol. Pokyny pre mužskú neplodnosť. © Európska asociácia urológie. 2016; 42.
5. Sukhikh G.T., Bozhedomov V.A. mužská neplodnosť. Praktická príručka pre urológov a gynekológov, Moskva: Eksmo, 2009. 240 s.: chorý. Lekárska prax.
6. Božedomov V.A. Mužský faktor bezdetného manželstva - spôsoby riešenia problému. Urológia. 2016. Číslo 1 (Príloha 1). s. 28–34.
7. Mirone V. (Ed.). Klinická Uro-andrológia. pružina; 2015. S. 197–205.
8. Hughes E.G., Grantmyre J., Zini A. Integrovaný prístup k mužskej subfertilite: preklenutie priepasti medzi špecialistami na plodnosť vyškolenými v urológii a gynekológii // J Obstet Gynaecol Can. marec 2015 Vol. 37 ods. S. 258–265.
9. Jae Hung Jung, Ju Tae Seo. Empirická liečebná terapia pri idiopatickej mužskej neplodnosti: Sľub alebo všeliek? // Clin Exp Reprod Med. 2014. Zv. 41 ods. S. 108–114.
10. Singh A., Jahan N., Radhakrishnan G. a kol. Na vyhodnotenie účinnosti kombinovanej antioxidačnej terapie na parametre oxidačného stresu v semennej plazme u mužskej neplodnosti // J Clin Diagn Res. 2016. Zv. 10(7). S. 14–17.
11. Garolla A., Ghezzi M., Cosci I. a kol. Liečba FSH u neplodných mužov kandidátov na asistovanú reprodukciu zlepšila fragmentáciu DNA spermií a mieru tehotenstva. endokrinný. 27. júla 2016.
12. Simoni M., Santi D., Negri L. a kol. Liečba ľudským, rekombinantným FSH zlepšuje fragmentáciu DNA spermií u idiopatických neplodných mužov v závislosti od polymorfizmu receptora FSH p.N680S: farmakogenetická štúdia // Hum Reprod. 2016 okt. Vol. 31(9). P. 1960–1969.
13. Bozhedomov V.A., Toroptseva M.V. Ushakova I.V. a kol. Reaktívne formy kyslíka a mužská reprodukčná funkcia: základné a klinické aspekty (prehľad literatúry) // Andrológia a genitálna chirurgia. 2011. č. 3. S. 26–33.
14. Zini A., Fischer M.A., Nam R.K. a kol. Použitie alternatívnych a hormonálnych terapií pri mužskej neplodnosti. Urológia 2004. Vol. 63. S. 141–143.
15. Tremellen K. Oxidačný stres a mužská neplodnosť – klinický pohľad. Hum.Reprod.Update. 2008 Vol. 14 ods. S. 243–258.
16. Agarwal A., Sekhon L.H. Oxidačný stres a antioxidanty pre idiopatickú oligoastenoteratospermiu: Je to opodstatnené? // Indian J Urol 2011. Vol. 27. S. 74.
17 Sabeti P., Pourmasumi S., Rahiminia T. a kol. Etiológie oxidačného stresu spermií. Int J Reprod BioMed 2016. Vol. 14. S. 231–240.
18. Akmal M., Qadri J.Q., Al-Waili N.S. a kol. Zlepšenie kvality ľudskej spermy po perorálnom doplnení vitamínu C // J Med Food. jeseň 2006. Vol. 9(3). S. 440–442.
19. Ross C., Morriss A., Khairy M. a kol. Systematický prehľad účinku orálnych antioxidantov na mužskú neplodnosť // Reprod Biomed Online. 2010 Vol. 20 ods. S. 711–123.
20. Zini A., Al-Hathal N. Antioxidačná terapia pri mužskej neplodnosti: skutočnosť alebo fikcia? // Ázijec J Androl. 2011 Vol. 13 ods. S. 374–381.
21. Showell M.G., Mackenzie-Proctor R., Brown J. a kol. Antioxidanty pre mužskú subfertilitu. Cochrane Database Syst Rev. 2014. (12): CD007411. doi: 10.1002/14651858.CD007411.pub3. Epub 2014, 15. decembra.
22. WHO (2010) Laboratórna príručka WHO pre vyšetrenie a spracovanie ľudskej spermy, 5. vydanie. WHO, Ženeva.
23. Agarwal A., Deepinder F. Stanovenie semenných oxidantov (reaktívne formy kyslíka) // Infertility in the Male, 4th edn (eds L.I. Lipshults, S.S. Howards & C.S. Niederberger), 2009. S. 618–632.
24. Gosalvez J., Lopez-Fernandez C., Fernandez J.L. Test chromatindisperzie spermií: technické aspekty a klinické aplikácie // Sperm Chromatin. Biologické a klinické aplikácie pri mužskej neplodnosti a asistovanej reprodukcii. Zini A., Agarwal A. (Eds.), Springer. 2011. S. 151–170.
25. Kamalov A.A., Aboyan I.A., Sitdykova M.E. a kol. Použitie biologicky aktívneho komplexu Androdoz® u pacientov s patospermiou a imunologickým faktorom neplodnosti. Výsledky multicentrickej klinickej štúdie // Farmateka. 2014. Číslo 4. S. 29–40.
26. Alchinbaev M.K., Medeubekov U.Sh., Khusainov T.E. a kol. Nové prístupy k liečbe patospermie // Urológia. 2013. Číslo 2. S. 46–49.
27. Dendeberov E.S., Vinogradov I.V. Skúsenosti s použitím biokomplexu AndroDoz na oplodnenie pacientov s idiopatickou patospermiou.Efektívna farmakoterapia. č. 2014. V. 47 (Urológia a nefrológia č. 4). s. 2–3.
28. Proskurin A.A., Golubkin E.A., Polivin P.A., Kazaryan E.E. Porovnávacie hodnotenie účinnosti komplexnej terapie idiopatickej neplodnosti // Problémy reprodukcie. 2013. Číslo 6. S. 65–66.
29. Neimark A.I., Klepíková I.I., Neimark B.A. a kol. Použitie AndroDoz u mužov s poruchou plodnosti // Andrológia a genitálna chirurgia. 2013. Číslo 4. S. 44–52.
30. Aitken J.R., De Iuliis G.N. Úloha oxidačného stresu v etiológii poškodenia DNA spermií // Spermový chromatín: biologické a klinické využitie pri mužskej neplodnosti a asistovanej reprodukcii / A. Zini, A. Agarwal (Ed.). 2011. Springer. R. 277–294.
31. Agarwal A., Durairajanayagam D., du Plessis D.S. Užitočnosť antioxidantov počas techník asistovanej reprodukcie: prehľad založený na dôkazoch // Reproductive Biology and Endocrinology 2014. Vol. 12. S. 112.
32. Yao D.F., Mills J.N. Mužská neplodnosť: faktory životného štýlu a holistické, doplnkové a alternatívne terapie // Asian Journal of Andrology. 2016. Zv. 18. S. 410–418.
33. Scott R., MacPherson A., Yates R.W., Hussain B., Dixon J. Vplyv perorálnej suplementácie selénu na motilitu ľudských spermií // Br J Urol. 1998 Vol. 82. S. 76–80.
34. Keskes-Ammar L., Feki-Chakroun N., Rebai T., Sahnoun Z., Ghozzi H., Hammami S. a kol. Oxidačný stres spermií a účinok perorálneho doplnku vitamínu E a selénu na kvalitu spermy u neplodných mužov // Syst Biol Reprod Med. 2003 Vol. 49. S. 83–94.
35. Omu A., Al-Azemi M., Kehinde E., Anim J., Oriowo M., Mathew T. Indikácie mechanizmov podieľajúcich sa na zlepšení parametrov spermií terapiou zinkom // Med Princ Pract. 2008 Vol. 17. S. 108–116.
36. Galatioto G.P., Gravina G.L., Angelozzi G. a kol. Môže antioxidačná terapia zlepšiť parametre spermií u mužov s pretrvávajúcou oligospermiou po retrográdnej embolizácii pre varikokélu? // World Journal of Urology. 2008 Vol. 26. S. 97–102.
37. Lombardo F., Sansone A., Romanelli F. a kol. Úloha antioxidačnej terapie pri liečbe mužskej neplodnosti: prehľad // Asian Journal of Andrology. 2011 Vol. 13. S. 690–697.
38. Menezo Y. J., Hazout A., Panteix G., Robert F., Rollet J., Cohen-Bacrie P., Chapuis F., Clement P., Benkhalifa M. Antioxidanty na zníženie fragmentácie DNA spermií: neočakávaný nepriaznivý účinok. // Reprod Biomed Online 2007. Vol. 14. S. 418–421.
39. Absalan F., Ghannadi A. Hodnota testu disperzie chromatínu v spermiách u párov s nevysvetliteľným opakovaným potratom. J Assist Reprod Genet. 2012. Zv. 29. S. 11–14.
40. Gharagozloo P., Aitken R.J. Úloha oxidačného stresu spermií pri mužskej neplodnosti a význam perorálnej antioxidačnej terapie // Hum Reprod. 2011 Vol. 26(7). S. 1628–1640.
41. Lombardo F., Sansone A., Romanelli F., Paoli D., Gandini L., Lenzi A. Úloha antioxidačnej terapie pri liečbe mužskej neplodnosti: prehľad // Asian J Androl. 2011 Vol. 13. S. 690–737.
42. Giustarini D., Dalle-Donne I., Colombo R., Milzani A., Rossi R. Je askorbát schopný redukovať disulfidové mostíky? // Varovná poznámka. Oxid dusnatý 2008. Vol. 19. S. 252–258.
43. Menezo Y., Evenson D., Cohen M., Dale B. Vplyv antioxidantov na genetické poškodenie spermií // Adv Exp Med Biol. 2014. Zv. 791. S. 173 – 89. doi: 10.1007/978-1-4614-7783-9_11. preskúmanie. PubMed PMID: 23955679.
Cielená produkcia ROS živými bunkami
Všetky organizmy sú vybavené rôznymi mechanizmami na cielenú tvorbu ROS. O enzýme NADPH oxidáza je už dlho známe, že aktívne produkuje „toxický“ superoxid, za ktorým sa vytvára celá gama ROS. Ale až donedávna sa považovala za špecifickú príslušnosť fagocytujúcich buniek imunitného systému, čo vysvetľuje potrebu produkcie ROS kritickými okolnosťami ochrany proti patogénnym mikroorganizmom a vírusom. Teraz je jasné, že tento enzým je všadeprítomný. On a podobné enzýmy sa nachádzajú v bunkách všetkých troch vrstiev aorty, vo fibroblastoch, synocytoch, chondrocytoch, rastlinných bunkách, kvasinkách, v obličkových bunkách, neurónoch a astrocytoch mozgovej kôry O 2 - á produkujú ďalšie všadeprítomné enzýmy: NO -syntáza, cytochróm P-450, gama-glutamyltranspeptidáza a zoznam sa stále rozrastá. Nedávno sa zistilo, že všetky protilátky sú schopné produkovať H202, t.j. sú to tiež generátory ROS. Podľa niektorých odhadov aj v pokoji prechádza 10-15% všetkého kyslíka spotrebovaného živočíchmi o jeden elektrón a v strese, keď sa aktivita enzýmov generujúcich superoxidy prudko zvyšuje, intenzita redukcie kyslíka sa zvyšuje o ďalších 20%. . ROS by teda mal hrať veľmi dôležitú úlohu v normálnej fyziológii.
1Tento prehľadový článok zvažuje aktuálne existujúce predstavy o mechanizmoch, ktoré sú základom tvorby reaktívnych foriem kyslíka počas permeabilizácie mitochondriálnej membrány. Uvažuje sa o úlohe vápenatých iónov a komplexov mitochondriálneho dýchacieho reťazca. Diskutuje sa o vplyve hladiny pyridínových nukleotidov, zložiek antioxidačného systému, ako aj o účasti matricových Ca2+-aktivovaných dehydrogenáz. V literatúre sú údaje, ktoré ukazujú, že indukcia mitochondriálnych pórov závislých od Ca2+ spôsobuje konformačné preskupenia respiračných komplexov I, II a III, čo zvyšuje tvorbu reaktívnych foriem kyslíka. Vstup vápnika do mitochondriálnej matrice môže zvýšiť rýchlosť produkcie reaktívnych foriem kyslíka v dôsledku aktivácie pyruvátdehydrogenázy a α-ketoglutarátdehydrogenázy, ako aj podporiť uvoľňovanie cytochrómu c do cytosolu po indukcii mitochondriálneho póru. Uvoľňovanie glutatiónu a redukovaných pyridínových nukleotidov cez póry znižuje antioxidačnú ochranu mitochondriálnej matrice a zvyšuje produkciu superoxidového aniónu a peroxidu vodíka. Fenomén výbuchu reaktívnych foriem kyslíka spôsobený mitochondriálnou permeabilizáciou sprevádza rôzne patologické stavy vrátane ischémie s následnou reperfúziou, preto je pochopenie molekulárnych procesov, ktoré sú jej základom, nevyhnutné pre ďalší vývoj metód na jeho farmakologickú korekciu.
reaktívne formy kyslíka
mitochondriálny pór
mitochondriálny dýchací reťazec
1. Halestrap A.P., Richardson A.P. Prechod mitochondriálnej permeability: súčasný pohľad na jeho identitu a úlohu pri ischémii / reperfúznom poškodení // Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 2015. Zv. 78. S. 129-141.
2. Brookes P.S., Yoon Y., Robotham J.L. a kol. Vápnik, ATP a ROS: mitochondriálny trojuholník lásky a nenávisti // American Journal of Physiology. bunkovej fyziológie. 2004 Vol. 287(4). P. 817-833.
3. Ruiz-Ramírez A., López-Acosta O., Barrios-Maya M.A., El-Hafidi M. Bunková smrť a srdcové zlyhanie pri obezite: úloha odpájajúcich sa proteínov // Oxidačná medicína a bunková dlhovekosť. 2016. Zv. 2016. S. 1-11.
4. Zorov D.B., Juhaszová M., Sollott S.J. Mitochondriálne reaktívne formy kyslíka (ROS) a uvoľňovanie ROS indukované ROS // Fyziologické prehľady. 2014. Zv. 94(4). P. 909-950.
5. Andrienko T., Pasdois P., Rossbach A., Halestrap A.P. Merania fluorescencie ROS v reálnom čase a v ischemických/reperfúznych srdciach potkanov: detegovateľné zvýšenia sa vyskytujú až po otvorení mitochondriálnych pórov a sú oslabené ischemickým predkondicionovaním // PLoS ONE. 2016. Zv. 11 (12).
6. Korge P., John S.A., Calmettes G., Weiss J.N. Produkcia reaktívnych foriem kyslíka vyvolaná otvorením pórov v srdcových mitochondriách: úloha komplexu II // The Journal of Biological Chemistry. 2017 Vol. 292 (24). P. 9896-9905.
7. Korge P., Calmettes G., John S.A., Weiss J.N. Produkcia reaktívnych foriem kyslíka vyvolaná otvorením pórov v srdcových mitochondriách: Úloha komplexu III // The Journal of Biological Chemistry. 2017 Vol. 292 (24). P. 9882-9895.
8. Batandier C., Leverve X., Fontaine E. Otvorenie póru prechodu mitochondriálnej permeability indukuje produkciu reaktívnych foriem kyslíka na úrovni komplexu dýchacieho reťazca I // The Journal of Biological Chemistry. 2004 Vol. 279 (17). P. 17197-17294.
9. Cadenas S. ROS a redoxná signalizácia pri ischémii myokardu, reperfúznom poškodení a kardioprotekcii // Free Radical Biology and Medicine. 2018 Vol. 117. S. 76-89.
10. Chouchani E.T., Pell V.R., James A.M. a kol. Zjednocujúci mechanizmus produkcie mitochondriálneho superoxidu počas ischemicko-reperfúzneho poškodenia // Bunkový metabolizmus. 2016. Zv. 23 ods. S. 254-263.
11. Grivennikova V.G., Vinogradov A.D. Generovanie reaktívnych foriem kyslíka mitochondriami // Pokroky v biologickej chémii. 2013. V. 53. S. 245-296.
12. Maklashina E., Sher Y., Zhou H.Z. a kol. Účinok anoxie / reperfúzie na reverzibilný aktívny / deaktívny prechod NADH-ubichinón oxidoreduktázy (komplex I) v srdci potkana // Biochimica et Biophysica Acta. 2002 Vol. 1556(1). S. 6-12.
13. Grivennikova V.G., Kareyeva A.V., Vinogradov A.D. Aké sú zdroje produkcie peroxidu vodíka srdcovými mitochondriami? // Biochimica et Biophysica Acta. 2010 Vol. 1797 (6-7). P. 939-944.
14. Chouchani E.T., Methner C., Nadtochiy S.M. a kol. Kardioprotekcia pomocou S-nitrozácie cysteínového spínača mitochondriálneho komplexu I // Nature Medicine. 2013. Zv. 19(6). P. 753-759.
15. Imlay, J.A. Metabolický enzým, ktorý rýchlo produkuje superoxid, fumarát reduktázu Escherichia coli // Journal of Biological Chemistry. 1995 Vol. 270. S. 19767-19777.
16. Siebels I., Drose S. Inhibítorom Q miesta indukovaná produkcia ROS mitochondriálneho komplexu II je oslabená dikarboxylátmi cyklu TCA // Biochimica et Biophysica Acta. 2013. Zv. 1827 (10). S. 1156-1164.
17. Quinlan C.L., Orr A.L., Perevoshchikova I.V. a kol. Mitochondriálny komplex II môže vytvárať reaktívne formy kyslíka vysokou rýchlosťou v priamych aj spätných reakciách // Journal of Biological Chemistry. 2012. Zv. 287 (32). P. 27255-27264.
18. Grivennikova V.G., Kozlovský V.S., Vinogradov A.D. Respiračný komplex II: Produkcia ROS a kinetika redukcie ubichinónu // Biochimica et Biophysica Acta. 2017 Vol. 1858(2). S. 109-117.
19. Chouchani E.T., Pell V.R., Gaude E. a kol. Ischemické akumulácie sukcinátu riadia reperfúzne poškodenie prostredníctvom mitochondriálnych ROS // Nature. 2014. Zv. 515. S. 431-435.
20. Lemarie A., Huc L., Pazarentzos E. a kol. Špecifická dezintegrácia komplexu II sukcinát:ubichinón oxidoreduktáza spája zmeny pH s oxidačným stresom pre indukciu apoptózy // Bunková smrť a diferenciácia. 2011 Vol. 18 ods. S. 338-349.
21. Huang L.S., Cobessi D., Tung E.Y., Berry E.A. Väzba inhibítora dýchacieho reťazca antimycínu na mitochondriálny komplex bc1: nová kryštálová štruktúra odhaľuje zmenený vzor intramolekulárnych vodíkových väzieb // Journal of Molecular Biology. 2005 Vol. 351(3). S. 573-597.
22. Vercesi A.E. Účasť NADP, transmembránový potenciál a energeticky viazaná NAD(P) transhydrogenáza v procese odtoku Ca2+ z mitochondrií pečene potkana // Archívy biochémie a biofyziky. 1987 Vol. 252(1). S. 171-178.
23. Peng T.I., Jou M.J. Oxidačný stres spôsobený mitochondriálnym preťažením vápnikom // Annals of the New York Academy of Sciences. 2010 Vol. 1201. S. 183-188.
24. Starkov A.A. Aktualizácia úlohy mitochondriálnej α-ketoglutarátdehydrogenázy pri oxidačnom strese // Molekulárna a bunková neuroveda. 2013. Zv. 55. S. 13-16.
25. Nickel A.G., von Hardenberg A., Hohl M. a kol. Zvrat mitochondriálnej transhydrogenázy spôsobuje oxidačný stres pri zlyhaní srdca // Bunkový metabolizmus. 2015. Zv. 22 ods. S. 472-484.
26. Wei A.C., Liu T., Winslow R.L., O "Rourke B. Dynamika Ca2+ bez matrice v srdcových mitochondriách: dve zložky vychytávania Ca2+ a úloha fosfátového tlmenia // Journal of General Physiology. 2012. Vol. 139 ( 6), str. 465-478.
27 Denton R.M. Regulácia mitochondriálnych dehydrogenáz vápenatými iónmi // Biochimica et Biophysica Acta. 2009 Vol. 1787 (11). S. 1309-1316.
28. Patterson S.D., Spahr C.S., Daugas E. a kol. Hmotnostná spektrometrická identifikácia proteínov uvoľnených z mitochondrií podliehajúcich prechodu permeability // Bunková smrť a diferenciácia. 2000 Vol. 7(2). S. 137–144.
29. Ott M., Robertson J.D., Gogvadze V. a kol. Uvoľňovanie cytochrómu c z mitochondrií prebieha dvojkrokovým procesom // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2002 Vol. 99(3). S. 1259–1263.
30. Pereverzev M.O., Vygodina T.V., Konstantinov A.A., Skulachev V.P. Cytochróm c, ideálny antioxidant // Biochemical Society Transactions. 2003 Vol. 31. Pt. 6. S. 1312–1315.
Permeabilizácia vonkajšej mitochondriálnej membrány je definovaná ako prudké zvýšenie jej permeability pre ióny a roztoky s hmotnosťou menšou ako 1,5 kDa, čo vedie k strate membránového potenciálu, opuchu mitochondrií, prasknutiu ich vonkajšej membrány a uvoľneniu apoptogénnych faktorov. Tento proces nastáva po otvorení megakanála známeho ako Ca2+-dependentný nešpecifický mitochondriálny pór (mPTP). Otvorenie mPTP sa javí ako kľúčový faktor spôsobujúci bunkovú smrť a ireverzibilné poškodenie orgánov pri mnohých patologických stavoch, ako je ischémia, po ktorej nasleduje reperfúzia, neurodegeneratívne ochorenia a svalová dystrofia.
Hlavným aktivátorom mPTP je vápnik, pričom citlivosť na katión sa mnohonásobne zvyšuje pri oxidačnom strese. Tieto stavy sú pozorované počas ischémie/reperfúzie a predpokladá sa, že sú hlavným spúšťačom otvorenia mPTP. Predpoklad, že hlavný nárast reaktívnych foriem kyslíka (ROS) nastáva počas otvárania pórov a po ňom, bol dlho spochybňovaný, pretože je známe, že jeho indukcia vedie k odpojeniu mitochondrií, čo zase znižuje výroba ROS. Skupina D. Zorova však zistila, že akumulácia ROS v mitochondriálnej matrici srdcových myocytov počas fotoaktivácie derivátov tetrametylrodamínu spúšťa indukciu mPTP, ktorá je sprevádzaná mnohonásobne zvýšenou produkciou („burst“) ROS. Autori nazvali tento jav ROS-indukované uvoľňovanie ROS ("ROS - induced ROS releases" (RIRR)). Následne sa objavilo mnoho dokumentov demonštrujúcich nárast ROS spôsobený indukciou mPTP. Uvoľnenie ROS do cytosolu môže aktivovať redox-senzitívne enzýmy, ako aj spustiť komplexnú signalizačnú odpoveď a tvorbu ROS v susedných mitochondriách. Tento proces má dôležitý fyziologický a patologický význam, pretože môže vyvolať smrť nielen starých a poškodených mitochondrií a buniek, ale aj zdravých. Otázka dráh tvorby ROS počas indukcie mPTP má veľký vedecký a praktický význam, ale dodnes zostáva otvorená.
Účel štúdie
Preskúmať súčasné literárne údaje a hypotézy o miestach a mechanizmoch produkcie ROS počas permeabilizácie vonkajšej mitochondriálnej membrány.
Komplex I mitochondriálneho dýchacieho reťazca
Komplex I (NADH-ubichinón oxidoreduktáza) je jedným z hlavných miest produkcie ROS v mitochondriách. Predpokladá sa, že hlavnými miestami generovania ROS v ňom sú flavínový mononukleotid väzbového miesta NADH (miesto If) a koenzým ubisemichinónového miesta viazania Q (miesto Iq). K produkcii superoxidu v mieste I f dochádza počas priameho transportu elektrónov, keď je FMN vo vysoko redukovanom stave a závisí od pomeru NADH/NAD + v matrici. Inhibítor miesta viazania koenzýmu Q rotenón zvyšuje produkciu superoxidu tým, že spôsobuje návrat elektrónov do FMN. K produkcii superoxidu na komplexe I dochádza aj počas reverzného transportu elektrónov, keď je zásoba koenzýmu Q úplne znížená.
Za patologických podmienok môže byť zvýšenie účinnosti miest generujúcich ROS komplexu I spojené s jeho konformačnými preskupeniami. Otvorenie mPTP výrazne znižuje aktivitu NADH-ubichinón reduktázy reagujúcu na rotenón a zvyšuje produkciu H202 v prítomnosti ≥50 uM NADH. NADH-ubichinónoxidoreduktáza sa vyznačuje pomalým prechodom z aktívneho stavu do neaktívneho a naopak. To naznačuje veľké konformačné preskupenia komplexu, aspoň v tej jeho časti, ktorá sa podieľa na redukcii ubichinónu citlivej na rotenón. Ukázalo sa, že komplex I izolovaný zo sŕdc potkanov podrobených 30-minútovej anoxickej perfúzii prešiel do neaktívneho stavu a po reoxygenácii sa vrátil do aktívneho stavu. Autori predpokladali, že tieto konformačné preskupenia môžu byť spojené s tvorbou ROS po reoxygenácii koronárnych okludovaných srdcových tkanív. Prechod komplexu do neaktívneho stavu je sprevádzaný špecifickým demaskovaním podjednotky Cys39 ND3. Ukázalo sa, že nitrozujúce zlúčeniny, ktoré reverzibilne modifikujú tento cysteín, môžu byť použité ako farmakologická obrana proti tvorbe ROS počas reperfúzie.
Komplex II mitochondriálneho dýchacieho reťazca
Komplex II alebo sukcinát-ubichinón oxidoreduktáza je tetramérny klaster železa a síry obsahujúci flavoproteín vnútornej membrány mitochondrií. Súčasne sa podieľa na práci Krebsovho cyklu a dýchacieho reťazca, pričom premieňa sukcinát na fumarát a redukuje ubichinón na ubichinol.
V práci bola prvýkrát ukázaná možnosť tvorby ROS flavínom fumarát reduktázy E. coli (miesto II f) v prítomnosti nízkych koncentrácií dikarboxylových kyselín. Následne bola demonštrovaná produkcia ROS v submitochondriálnych časticiach mitochondrií srdca a kostrového svalstva hovädzieho dobytka. Inhibítor komplexu II atpenín A5 a inhibítor komplexu III stigmatellin, ktorý blokuje oxidáciu ubichinolu komplexom III, stimuluje produkciu ROS komplexom II v prítomnosti sukcinátu. Malonát naopak inhibuje tvorbu ROS komplexom II, čo naznačuje, že ROS sa tvoria v úplne redukovanom flavínovom mieste IIf, hoci iné miesta nie sú vylúčené. Závislosť produkcie peroxidu vodíka od koncentrácie sukcinátu má tvar zvona: hladina peroxidu sa zvyšuje so zvyšujúcou sa koncentráciou substrátu až do 400 μM, potom výrazne klesá pri milimolárnych koncentráciách bežne používaných na mitochondriálnu energizáciu. Dôvodom tohto javu je, že komplex II generuje ROS len vtedy, keď jeho miesto flavínu IIf nie je obsadené dikarboxylovými kyselinami. Sukcinát a ďalšie medziprodukty Krebsovho cyklu, ktoré interagujú s väzbovým miestom dikarboxylovej kyseliny, môžu obmedziť prístup kyslíka k nemu a tak potlačiť produkciu ROS komplexom II. Hladiny sukcinátu a fumarátu v matrici sa zvyšujú počas ischémie/hypoxie, ale to nebráni tvorbe ROS. Na rozdiel od toho sa ukázalo, že akumulácia sukcinátu počas ischémie vysoko koreluje s produkciou ROS a reperfúznym poškodením. Autori navrhli, že hlavným zdrojom ROS za týchto podmienok je spätný tok elektrónov cez komplex I. Avšak v podmienkach dlhotrvajúcej ischémie, keď sú membrány úplne depolarizované, je tento mechanizmus ťažko uskutočniteľný. Alternatívny mechanizmus na generovanie ROS navrhuje získanie prístupu kyslíka k redukovanému miestu IIf v dôsledku zníženia obsahu dikarboxylových kyselín v jeho bezprostrednej blízkosti v dôsledku zrýchleného uvoľňovania sukcinátu a fumarátu z matrice počas indukcie mPTP. Tento mechanizmus vyžaduje inhibíciu komplexu II na úrovni redukcie ubichinónu alebo inhibíciu oxidácie ubichinolu komplexom III.
Konformačné preskupenia komplexu II môžu tiež prispieť k nárastu ROS počas membránovej permeabilizácie. Ukázalo sa, že s poklesom intracelulárneho pH pozorovaným počas apoptózy dochádza k disociácii komplexu II: podjednotky sukcinátdehydrogenázy SDHA a SDHB, ktoré oxidujú sukcinát na fumarát a prenášajú elektróny cez zhluky železa a síry, sú oddelené od miesta redukcie koenzým Q sukcinát CoQ oxidoreduktáza (SQR). To vedie k inhibícii aktivity SQR, zatiaľ čo aktivita sukcinátdehydrogenázy zostáva normálna. Takáto disociácia vedie k priamej jednoelektrónovej redukcii kyslíka železo-sírovým klastrom komplexu II. A hoci je známe, že nízke pH je inhibítorom mPTP, napriek tomu tento mechanizmus nárastu ROS môže prebiehať pri ischémii, kedy pH klesá. V tomto čase môže dôjsť ku konformačným preskupeniam komplexu II a následne počas reperfúzie, keď sa pH obnoví na počiatočnú úroveň, sa otvorí mPTP a pozoruje sa nárast ROS vytvorený na disociovanom komplexe.
Komplex III mitochondriálneho dýchacieho reťazca
Komplex III (ubichinol-cytochróm s oxidoreduktáza) je ďalším možným miestom pre tvorbu ROS. Tento proteín prenáša elektróny z ubichinónu do cytochrómu s počas fungovania takzvaného Q-cyklu. Počas tohto procesu dochádza k tvorbe nestabilného semichinónu, ktorý môže preniesť elektrón na kyslík za vzniku superoxidového radikálu. Za normálnych podmienok je však takáto reakcia nepravdepodobná, pretože semichinón je rýchlo oxidovaný cytochrómom b. K prudkému zvýšeniu hladiny superoxidu dochádza pri inhibícii komplexu antimycínom A, ako aj pri ischémii trvajúcej viac ako 30 minút. Jedným z dôvodov tohto javu môžu byť jeho konformačné preskupenia spôsobené väzbou inhibítora. V izolovaných srdcových mitochondriách sa ukázalo, že komplex III inhibovaný antimycínom A generuje významné množstvá ROS v prítomnosti Mg2+ a NAD+ a v neprítomnosti exogénnych substrátov po indukcii mPTP vápnikom a alameticínom. Autori ukázali, že za týchto podmienok produkcia peroxidu vodíka súvisí s Mg2+ závislou tvorbou NADH malátdehydrogenázou. Produkcia H202 bola inhibovaná stigmatelínom a pyricidínom, čo naznačuje dôležitosť redukcie ubichinónu závislej od NADH pre tvorbu ROS za týchto podmienok. Tieto údaje podporujú hypotézu, že počas ischémie počas indukcie mPTP zvýšenie koncentrácie Mg 2+, NAD + v matrici aktivuje malátdehydrogenázu, ktorá obnoví NAD + pomocou malátu, ktorého koncentrácia sa zvyšuje v dôsledku zvýšenia hladiny sukcinátu a fumarátu. Redukované ekvivalenty idú na inhibovaný komplex III, čo vedie k výbuchu ROS.
Role pyridínových nukleotidov pri tvorbe ROS
Už skôr sa ukázalo, že oxidácia NAD(P)H mitochondriálnej matrice predchádza otvoreniu mPTP. Okrem toho indukcia pórov vedie k úniku pyridínových nukleotidov do bunkového cytosólu. Táto zmena v rovnováhe NAD(P)H by mala ovplyvniť produkciu ROS počas mitochondriálnej permeabilizácie. Závislosť tvorby ROS od koncentrácie NADH skúmala skupina A. Vinogradova. Ukázalo sa, že maximálna produkcia superoxidu dosahuje maximum pri koncentrácii NADH 10-50 μM, pri milimolárnych koncentráciách je produkcia radikálu inhibovaná. Pretože fyziologické koncentrácie páru NADH/NAD + matrica sú v milimolárnom rozsahu, príspevok komplexu I k tvorbe ROS za normálnych podmienok môže byť nevýznamný. Zistilo sa, že v permeabilizovaných mitochondriách je vysoká produkcia H 2 O 2, závislá od pomeru NAD(P)H/NAD(P) + a stimulovaná amónnymi iónmi. Súčasne bol výťažok peroxidu vodíka necitlivý na dikumarol (inhibítor NADHchinón oxidoreduktázy) a NADH-OH (inhibítor komplexu I), čo naznačuje matricovú lokalizáciu miesta generujúceho H2O2. Študovaný proteín mal aktivitu NADH:lipoamidoxidoreduktázy a bol identifikovaný ako dihydrolipoamiddehydrogenáza. Tento proteín je dôležitou zložkou (takzvaná zložka E3) dvoch mitochondriálnych enzýmov obsahujúcich FAD: komplexu α-ketoglutarátdehydrogenázy a komplexu pyruvátdehydrogenázy. Podľa údajov získaných na purifikovaných komplexoch a na izolovaných mitochondriách je zložka E3 zodpovedná za produkciu superoxidu a peroxidu vodíka. Ukázalo sa, že permeabilizované NADH-oxidujúce mitochondrie srdca potkana produkujú asi 50 % peroxidu vodíka pôsobením komplexu I, pričom zvyšných 50 % pochádza z dihydrolipoamid dehydrogenázy.
Redukované formy pyridínových nukleotidov nielen dodávajú elektróny do dýchacieho reťazca mitochondrií, ale prostredníctvom pro- a antioxidačných proteínov regulujú aj redoxný stav matrice. Jedným z takýchto proteínov je glutatión, ktorý je spolu s NADPH substrátom pre antioxidačné proteíny glutatiónperoxidázu a glutatiónreduktázu. Pri otvorení mPTP sa môže uvoľniť NADPH a glutatión, čo spôsobí akumuláciu H202. Navyše, za týchto podmienok, v dôsledku poklesu membránového potenciálu, nikotínamid nukleotid transhydrogenáza (NADPH-transhydrogenáza) nemôže udržať vysokú hladinu zníženého NADP +, čo prispieva k oxidačnému stresu. Za fyziologických podmienok tento enzým regeneruje NADPH v priamej reakcii s použitím NADH ako substrátu. Táto reakcia je energeticky priaznivá, pretože transhydrogenácia medzi NADH a NADPH je spojená s protónovým gradientom pozdĺž vnútornej membrány. Za patologických podmienok však môže postupovať opačným smerom a regenerovať NADH na syntézu ATP prostredníctvom využitia NADPH. Znižuje sa teda antioxidačná ochrana spojená s úrovňou zníženia NADP +, čo prispieva k tvorbe H 2 O 2 .
Role vápnika pri tvorbe ROS
Je známe, že zvýšenie koncentrácie vápnika v mitochondriálnej matrici spúšťa indukciu mPTP, zatiaľ čo citlivosť pórov na katión sa zvyšuje pri oxidačnom strese, zvýšením hladiny fosfátu a znížením zásoby adenínu. nukleotidy. Koncentrácia iónov vápnika v mitochondriálnej matrici je v rozmedzí približne 10 nM. Zároveň je ich kapacita vápnika veľmi vysoká, izolované mitochondrie sú schopné sekvestrovať viac ako 1 M vápnika z prostredia, pričom koncentrácia voľného vápnika je udržiavaná v mikromolárnom rozsahu, v ktorom je regulácia enzýmov závislých od Ca 2+ vyskytuje. Tieto enzýmy zahŕňajú pyruvátdehydrogenázu a a-ketoglutarátdehydrogenázu. Ich aktivácia vedie k zvýšeniu dýchania a syntézy ATP a pravdepodobne k zvýšeniu produkcie ROS.
V procese permeabilizácie mitochondriálnych membrán sa z medzimembránového priestoru a matrice uvoľní asi 100 proteínov, vrátane takých dôležitých prvkov antioxidačnej obrany, akými sú glutatión a cytochróm. s.
Cytochróm s je pozitívne nabitý proteín, ktorý je spojený s kardiolipínom na vonkajšej strane vnútornej mitochondriálnej membrány, ako aj s respiračnými komplexmi III a IV. Ukázalo sa, že uvoľňovanie cytochrómu s je dvojstupňový proces zahŕňajúci oddelenie proteínu od intramembránových väzbových miest a jeho následnú translokáciu cez vonkajšiu membránu. Ca2+ môže zvýšiť disociáciu cytochrómu s z vnútornej membrány, pretože je jej konkurentom pre väzbu na negatívne nabitý kardiolipín. Podporuje uvoľňovanie cytochrómu s do cytosolu po indukcii mPTP. Navyše ROS vznikajúci počas membránovej permeabilizácie môže spôsobiť oxidáciu kardiolipínu, čo vedie k zmene jeho fyzikálnych vlastností, čo môže tiež zvýšiť uvoľňovanie cytochrómu. s z mitochondrií a prispievajú k ešte väčšej tvorbe ROS. Znížená hladina proteínu spomaľuje transport elektrónov z komplexu III do komplexu IV a tým zvyšuje produkciu ROS v Q-cykle. Okrem toho cytochróm s sám o sebe je účinný antioxidant, schopný účinne redukovať superoxidový anión. Zvýšenie koncentrácie vápnika v mitochondriách má teda stimulačný účinok na matricové enzýmy produkujúce ROS a vedie k zníženiu antioxidačnej ochrany, čím sa zvyšuje celková hladina ROS generovaných mitochondriami.
Záver
Mitochondrie sú potenciálnym zdrojom aj cieľom ROS, čo vedie k strate mitochondriálnych funkcií a v dôsledku toho k nezvratnému poškodeniu buniek v mnohých patologických procesoch. Dôležitú úlohu zohráva mPTP, ktorého indukcia môže viesť k silnej tvorbe ROS, ktoré majú škodlivý účinok na susedné organely a celé bunky. V súčasnosti sú dôvody tohto javu málo pochopené, hoci v literatúre existuje niekoľko hypotéz. Predpokladá sa, že nárast ROS môže byť založený na konformačných preskupeniach komplexov dýchacieho reťazca, aktivácii matricových dehydrogenáz v dôsledku pôsobenia Ca2+, zmenách v rovnováhe NAD(P)H/NAD(P)+ matrice a vyčerpanie antioxidačného systému. Ďalšie štúdium mechanizmov a miest tvorby ROS počas indukcie mPTP sa javí ako nevyhnutné, keďže ich presné určenie umožní vyvinúť metódy na ich reguláciu, aby sa zabránilo vzniku mnohých patologických stavov v organizme.
Táto práca bola podporená grantom Ruskej vedeckej nadácie č.17-75-10122.
Bibliografický odkaz
Kharechkina E.S., Nikiforova A.B. MECHANIZMY GENERÁCIE AKTÍVNYCH KYSLÍKOVÝCH DRUHOV PRI PRIESTUPŇOVANÍ MITOCHONDRIÁLNYCH MEMBRÁN // Moderné problémy vedy a vzdelávania. - 2018. - č. 4.;URL: http://site/ru/article/view?id=27719 (dátum prístupu: 30.01.2020).
Dávame do pozornosti časopisy vydávané vydavateľstvom "Academy of Natural History"
Semenná tekutina mužov, známejšia ako semeno, sa v medicíne nazýva ejakulát. Ide o prirodzenú tekutinu vylučovanú semenníkmi, ktorá má charakteristickú mukóznu štruktúru, je viskózna a nepriehľadná.
K uvoľneniu ejakulátu dochádza v dôsledku sexuálneho vzrušenia počas sexuálnej intimity alebo masturbácie. Ejakulát má špecifickú vôňu, podobnú vôni gaštanu, svetlú, takmer bielu.
Chuť tekutiny závisí od produktov spotrebovaných mužom a jeho celkového zdravia. U zdravých samcov má mierne slanú chuť s trpkým nádychom. Ako každá tekutina v ľudskom tele, aj ejakulát možno vyšetrovať v laboratóriu, aby sa posúdil zdravotný stav pacienta.
Analýza ejakulátu sa vykonáva dvoma spôsobmi: bakteriologická kultivácia a spermogram.
Hlavné vlastnosti spermií
Pri pohlavnom styku alebo masturbácii sa uvoľňuje malé množstvo semennej tekutiny, ktorej objem závisí od viacerých faktorov. Podľa medicínskych noriem by sa mala pohybovať medzi dvoma až desiatimi mililitrami.
U dospelých mužov však môže byť množstvo spermií menšie a ich objem sa zmenšuje s každým pohlavným stykom, po ktorom nasledujú krátke dočasné prestávky. Preto sa lekári často zameriavajú na hranice normy od dvoch do piatich mililitrov.
Zástupcovia silnejšieho pohlavia veľmi často vnímajú zníženie množstva vylučovaných spermií ako alarmujúci znak, čo naznačuje zhoršenie mužskej sily a zdravia. V mladom veku muži veria, že čím viac spermií sa pri ejakulácii uvoľní, tým väčší vplyv to má na sexuálneho partnera.
V skutočnosti je množstvo uvoľneného ejakulátu a jeho kvalita dve úplne odlišné veci. Nie vždy je veľký objem spermií indikátorom jej vysokej plodnosti. Hlavná vec v ejakuláte je však počet zdravých a aktívnych spermií, ktoré sa môžu dostať k vajíčku a oplodniť ho.
Táto fertilizačná kapacita spermií sa vypočíta v laboratóriu. Podľa štúdií by 1 mililiter spermy mal obsahovať 20 až 25 miliónov zdravých spermií.
Samotný ejakulát pozostáva zo semennej plazmy a formovaných prvkov. Tie zahŕňajú nielen spermie, ale aj gonocyty. Seminálna plazma je základom spermií a je zodpovedná za ich správnu štruktúru. Vynikne, ak všetky vnútorné mužské orgány fungujú správne a hladko. Je možné posúdiť, aká zdravá je semenná tekutina, iba vykonaním laboratórnych testov.
Výsev ejakulátu a spermiogram sú predpísané pacientom v nasledujúcich prípadoch.
- Neplodnosť. Táto diagnóza sa stanovuje párom, ktorým sa počas roka aktívneho sexuálneho života nepodarilo samy počať dieťa.
- Ako vyšetrenie pred zákrokom mimotelového oplodnenia.
- Ak máte podozrenie na možnú stratu vlastností spermií v dôsledku prekonaných ochorení alebo poranení pohlavných orgánov (infekčné ochorenia, hormonálna nerovnováha, varikokéla atď.).
- Ako preventívne vyšetrenie na žiadosť pacienta.
- Štúdium ejakulátu je súčasťou povinnej diagnostiky pri plánovaní počatia bábätka manželským párom.
Hlavným cieľom tejto štúdie je však zistiť dôvod, ktorý bráni mužovi stať sa otcom, teda neplodnosť. Štúdium ejakulátu tiež pomáha zistiť dôvody zníženia objemu uvoľnenej tekutiny, zníženia počtu aktívnych spermií.
Tieto rozbory určia možné zápaly a infekcie, ktoré pacienta postihli, čo pomôže naštartovať nielen liečbu neplodnosti, ale aj iných ochorení, ako aj zvýšiť počet aktívnych spermií.
Kultivácia spermií je jednou z najčastejšie vykonávaných diagnostik, ktoré sa predpisujú na štúdium zdravia mužov. Diagnóza „neplodnosť“ sa čoraz častejšie objavuje u celkom zdravých mladých ľudí, ktorí sa nesťažujú na iné aspekty zdravia. Čo vedie k rozvoju tohto ochorenia?
V prvom rade je to chyba samotného pacienta. Nezdravý životný štýl, zlé návyky, nezdravá strava - to všetko vedie k hormonálnej nerovnováhe v tele, v dôsledku čoho klesá počet zdravých spermií a ich aktivita.
Promiskuita v sexuálnych vzťahoch, zanedbávanie pravidiel antikoncepcie a v dôsledku toho choroby reprodukčného systému ovplyvňujú aj schopnosť muža počať dieťa.
Tieto faktory zahŕňajú zlé podmienky prostredia, neustály stres a vysoký psycho-emocionálny stres, nedostatok minimálnej fyzickej aktivity a škodlivé pracovné podmienky.
Vďaka rozboru bude môcť lekár určiť presnú príčinu, prečo nedochádza k počatiu prirodzene, a tiež predpísať liečbu, ktorá tieto faktory odstráni, zlepší kvalitu spermií a obnoví prirodzené funkcie mužského zdravia. Takáto liečba zvyčajne zahŕňa množstvo aktivít: lieky, fyzioterapiu, zmeny životného štýlu.
Úlohou bakteriologického výsevu je zistiť príčiny, prečo nedochádza k počatiu, identifikovať možné zápaly, infekčné ochorenia a iné dysfunkcie reprodukčných systémov pacienta.
Bakteriologická kultivácia ejakulátu a spermogram
Pri vykonávaní tejto štúdie je možné identifikovať škodlivé mikroorganizmy prítomné v ejakuláte, ako aj zistiť citlivosť patogénnej mikroflóry na určité typy antibiotických liekov.
Baktérie a infekcie prítomné v semennej tekutine môžu spôsobiť zmenu štruktúry ejakulátu, teda zmenu jeho viskozity.
Tento jav sa nazýva viskozipatia. Dôvody jeho výskytu: prostatitída, varikokéla, orchitída, zápalové procesy v genitourinárnych orgánoch muža. Často sa vyskytujú prípady, keď lekár nedokáže určiť presnú príčinu týchto zmien, vtedy diagnóza znie ako „idiopatická viskozipatia“.
Na objasnenie diagnózy sa spolu s bakposevom vykonáva aj spermogram, ktorý potvrdzuje alebo vyvracia „syndróm viskóznych spermií“. S týmto javom dochádza v tele k poruchám fungovania vnútorných pohlavných orgánov, v dôsledku čoho procesy zodpovedné za riedenie semennej tekutiny neprebiehajú správne.
Ak je ejakulát príliš viskózny, hustý, spermie sa v ňom nemôžu voľne pohybovať, rýchlosť ich pohybu sa znižuje, nedostanú sa do vajíčkovodov a sú náchylnejšie na pôsobenie faktorov prostredia, prostredia vagíny a pod. maternica.
Bez klinických štúdií nie je možné zaznamenať takéto porušenia, pretože objem spermií môže zostať rovnaký, ale plodnosť je veľmi nízka. Bežne by viskozita ejakulátu nemala presiahnuť dva centimetre. Nadbytok sa stáva základom diagnózy "viskozipatie".
Pri vykonávaní spermogramu sa berú do úvahy také údaje a parametre semennej tekutiny, ako pri iných vyšetreniach, ako aj niektoré ďalšie charakteristiky: kvalita spermií, prítomnosť alebo neprítomnosť erytrocytov (za normálnych okolností by nemali byť), prítomnosť alebo neprítomnosť slizničné formy tekutiny, ako aj biochemické parametre .
Kedy je indikovaná bakteriologická kultivácia?
Kultivácia spermií sa uskutočňuje súbežne so štúdiom charakteristík sekrécie prostaty. Tieto postupy sú predpísané pre všetkých pacientov, u ktorých má lekár podozrenie na prítomnosť zápalového procesu.
Vyšetrenie je potrebné na identifikáciu infekčných ochorení a predpísanie liečby, ktorá dokáže tieto procesy zastaviť a zabrániť ich prechodu do akútnych alebo chronických štádií. 
Štúdia identifikuje patogénne mikroorganizmy, ktoré môžu vyvolať ochorenia v oblasti urológie alebo spôsobiť sexuálne prenosné choroby. Ide o jednu z vysoko citlivých štúdií, ktorá je potrebná nielen pre voľbu taktiky medikamentóznej terapie, ale aj pre sledovanie prebiehajúcej liečby.
Natívny ejakulát a reaktívne formy kyslíka
Jednou z najnovších metód na štúdium semennej tekutiny je štúdium natívnych (čistých, nespracovaných) spermií. Táto technika vám umožňuje študovať ejakulát na subcelulárnej úrovni, v dôsledku čoho sa určujú rôzne abnormálne javy prítomné v spermiách.
Na štúdium sa odoberajú „živé“ spermie, emitované pod mikroskopom, čo umožňuje ich zväčšenie 15 tisíc krát.
Na správne vykonanie štúdie je najlepšie darovať semennú tekutinu priamo na klinike, kde sa štúdie uskutočnia. Od momentu odberu do začiatku laboratórnej diagnostiky by nemala uplynúť viac ako jedna hodina. Ďalšou požiadavkou pred absolvovaním tejto analýzy je úplný sexuálny odpočinok niekoľko dní pred návštevou laboratória.
Rovnako ako v iných štúdiách, táto analýza skúma samotné spermie a semennú sekréciu. Tieto parametre musia spĺňať zdravé normy. Takže alkalická rovnováha by mala byť v rozmedzí od 7,2 do 7,8 pH, objem kvapaliny by mal byť aspoň dva ml. Počet spermií v 1 ml je najmenej 20 miliónov a najmenej 50 % z nich musí mať pohyb dopredu.
Celkový objem buniek s normálnou morfologickou štruktúrou by nemal byť menší ako tretina z celkového počtu.
Neaktívne a poškodené spermie by nemali tvoriť viac ako polovicu objemu získanej semennej tekutiny. Ak dôjde k porušeniu aspoň jedného z týchto parametrov, môžeme hovoriť o mužskej neplodnosti.
Sú situácie, kedy dochádza k nadmernej produkcii reaktívnych foriem kyslíka (ROS) v natívnom ejakuláte. ROS sú hlavnými príčinami oxidačných procesov v semennej tekutine. Príčiny tohto javu môžu byť ochorenia reprodukčného systému, autoimunitné poruchy tela, vplyvy prostredia.
Produkcia ROS sa tiež zvyšuje s vekom pacienta, s chronickými ochoreniami endokrinného systému, s ťažkou fyzickou námahou. To všetko ovplyvňuje objem spermií v ejakuláte a nedostatok ich potrebného množstva vedie k neplodnosti.
Ako sa pripraviť na analýzu
Aby ste vyšetrenie vykonali správne a získali čo najpresnejšie výsledky, mali by ste sa na podanie ejakulátu zodpovedne pripraviť. Zhromažďuje sa iba v špeciálnych sterilných jednorazových nádobách, ktoré sa vydávajú na klinike vykonávajúcej takéto testy.
Na zber je zakázané používať akékoľvek sklenené nádoby na potraviny, kondómy, igelitové vrecká a pod.
Je veľmi dôležité vyznačiť na nádobe nielen dátum, kedy bol ejakulát odobratý, ale aj presný čas. Presnosť niektorých ukazovateľov študovaných v diagnostickom procese bude závisieť od toho. Pri analýze sa oplatí uprednostniť kliniku odporúčanú ošetrujúcim lekárom.
Akonáhle sa ejakulát odoberie, treba ho okamžite odniesť do laboratória. Je nežiaduce skladovať zozbieraný biomateriál. Ak to však nie je možné, nádobu nie je potrebné chladiť.
Optimálna teplota skladovania je od 20 do 40 stupňov. Nedostatok správnych podmienok skladovania môže viesť k nesprávnym výsledkom. Tiež niekoľko dní pred analýzou stojí za to opustiť intímne vzťahy.
Výsledky analýz sa zvyčajne získajú do jedného dňa odo dňa doručenia biomateriálu do laboratória. Prijatý formulár s osobnými údajmi, základnými parametrami, normami a študovanými ukazovateľmi je daný pacientovi.
Interpretáciu prijatých údajov vykonáva iba ošetrujúci lekár, ktorý dal smer diagnózy. Stanoví tiež konečnú diagnózu a predpíše terapeutickú terapiu. Niekedy môže byť potrebné konzultovať okrem špecialistu na reprodukciu aj ďalších odborníkov: urológa, venerológa, chirurga, endokrinológa.
Na základe výsledkov laboratórnych vyšetrení lekár určí presnú príčinu neplodnosti a predpíše liečbu určenú na zvýšenie počtu aktívnych a zdravých spermií v semennej tekutine. Ale okrem užívania liekov a rôznych fyzioterapií by liečba mala zahŕňať aj ďalšie parametre.
Udržiavanie zdravého životného štýlu pomôže zvýšiť kvalitu spermií. Vyhýbanie sa alkoholu a cigaretám pomáha zlepšiť výsledky testov v čo najkratšom čase.
Ejakulát sa zlepší, ak do života pacienta vstúpi aj minimálna fyzická aktivita: ranné cvičenia, prechádzky, odmietnutie výťahu atď.
Ak je možné navštevovať fitness centrá, mali by ste dať prednosť tréningom, ktoré nevedú k nadmernému prehrievaniu organizmu. Môže to byť plávanie, joga, strečingové cvičenia.
Prestávky v práci sú tiež schopné zvýšiť počet aktívnych spermií, ak sú spojené s dlhým sedením na jednom mieste. Pravidelné prestávky každú hodinu, počas ktorých môže pacient vstať a prejsť sa po miestnosti, umožnia nielen odpočinok očí, ale aj zlepšenie krvného obehu v panve, čo priamo ovplyvňuje zdravotný stav mužov.
Ak nie je možné vstať, môžete vykonať niekoľko cvičení v sede.
Je dôležité jesť správne a pravidelne, odmietnuť občerstvenie, najmä nezdravé jedlo. Aby bol ejakulát kvalitnejší, základom stravy by mali byť bielkovinové a zeleninové produkty, ako aj ryby a kyslomliečne nápoje. Jesť treba pravidelne, často a v malých porciách.
Stojí za to vyhnúť sa zbytočnému stresu a emočnému preťaženiu, ktoré tiež priamo ovplyvňuje zdravotný stav mužov.
Odmietnutie návštevy miest, kde dochádza k zvýšeniu teploty, pomôže zvýšiť objem spermií: kúpeľný dom, pláž. Spodná bielizeň, najmä v lete, by mala byť vyrobená iba z prírodných tkanín.
Syntetika zvyšuje telesnú teplotu v slabinách, čo znižuje kvalitu spermií.
Takéto jednoduché opatrenia pomôžu doplniť liečbu predpísanú ošetrujúcim odborníkom, zlepšiť výsledky testov v kratšom čase a rýchlejšie počať dlho očakávané dieťa.
Sexopatológ-andrológ I. kategórie. Vedúci chersonskej pobočky Ukrajinskej asociácie pre plánované rodičovstvo.
Andrologické laboratórium
Spermogram podľa WHO 2010 1607 s.
Protilátky proti spermiám na spermiách (Mar test nepriamy Ig G) 1928 s.
Antispermové protilátky na spermiách (Mar nepriamy Ig A test) 1928 s.
Protilátky proti spermiám na spermiách (Mar direct Ig G test) 1499 s.
Protilátky proti spermiám na spermiách (Mar direct Ig A test) 1499 s.
Postkoitálny test (in vivo test) 2142 s.
Test Kurzrock Miller 2142 s.
Laboratórium klinickej andrológie vykonáva špeciálne testy pre mužov
Všetci chlapci pred armádou v škole absolvujú lekársku prehliadku. Pomáha to identifikovať rôzne poruchy, vrátane porúch súvisiacich s reprodukčným zdravím. Zriedka, keď sa mladý muž v budúcnosti z vlastnej iniciatívy obráti na lekára na profylaxiu. Na vyšetrenie prichádzajú v podstate vtedy, keď už sú sťažnosti, či už na podnet partnera, alebo v legálnom manželstve, keď sa im niekoľko rokov nedarí počať dieťa.
Vo všetkých týchto prípadoch, ako pre prevenciu, tak aj pri výskyte rôznych problémov, je našou úlohou objektívne posúdiť situáciu, vybrať správny zoznam potrebných testov, vykonať prieskum a poslať výsledky na e-mail pacienta. V prípade potreby môže pacient v budúcnosti prediskutovať výsledky týchto vyšetrení s urológom-andrológom alebo gynekológom-reproduktológom, ktorí pracujú v našej ambulancii.
Hlavným smerom laboratória klinickej andrológie je mužská neplodnosť a kombinované formy mužskej a ženskej neplodnosti, ako aj infekčné a zápalové procesy mužského genitourinárneho systému.
Pracovníci laboratória - lekári, medicínski technológovia, laboranti - spolupracujú už 6 rokov, sú poprednými odborníkmi v spermatológii u nás. Mnohé majú skúsenosti vo Vedeckom centre pre pôrodníctvo a gynekológiu. V.I. Kulakov, Urologická klinika. R. M. Fronshtein z Prvej Moskovskej štátnej lekárskej univerzity. ONI. Sechenov, andrologická klinika Univerzity priateľstva národov Ruska. Laboratórne štúdie vykonávané našimi zamestnancami tvoria základ mnohých vedeckých prác v andrológii, dizertačných a publikačných prác, vrátane. v popredných anglicky písaných časopisoch.
Kvalifikácia, potrebné vybavenie a dlhoročné skúsenosti nám umožňujú vykonávať rôzne spermiogramy na expertnej úrovni.
Analýzy sa vykonávajú presne podľa všetkých požiadaviek WHO-2010.
Do klinickej praxe boli zavedené najmodernejšie metódy hodnotenia funkcie spermií: oxidačný stres, akrozomálna reakcia, fragmentácia DNA, poruchy balenia chromatínu atď.
Všetky rozbory sa robia tu v laboratóriu, nikam sa neodvážajú, hneď ako je materiál skvapalnený.
Sú tu výborné podmienky na darovanie spermií: samostatná zvukotesná miestnosť s WC a umývadlom, veľký televízor. Miestnosť na darovanie spermií sa nachádza priamo pri laboratóriu.
Vyšetrenie ejakulátu (spermie) – základné požiadavky
Štúdium spermií - koncentrácia, pohyblivosť a morfológia spermií, obsah leukocytov, antispermové protilátky, poškodenie DNA a mnohé ďalšie funkčné ukazovatele - je hlavnou metódou hodnotenia mužskej plodnosti.
Napriek zavedeniu výpočtovej techniky je rozbor spermy vykonávaný skúseným laboratórnym lekárom stále najpresnejšou, najspoľahlivejšou a reprodukovateľnou diagnostickou metódou.
Analýza spermií by sa mala vykonávať v špecializovaných laboratóriách, a nie vo všeobecných laboratóriách (najmä nie v sieťových laboratóriách), pretože popis väčšiny parametrov spermogramu - motilita, morfológia, test MAP atď. - je subjektívny a závisí vo veľkej miere od prax a kvalifikácia laboratórneho lekára. V ideálnom prípade by analýzu semena v dynamike mal vykonávať jeden špecialista, pretože aj pri prísnej internej kontrole kvality v laboratóriu sa môžu vyskytnúť nezrovnalosti vo výsledkoch, keď analýzu vykonávajú rôzni lekári.
Spermie sú ťažký materiál. Zvýšenú viskozitu, chybné doručenie, prítomnosť leukocytov, nezrelé bunky spermatogenézy, baktérie, rôzne kategórie pohyblivosti môže správne určiť iba lekár s rozsiahlymi skúsenosťami. Normy WHO pre testovanie spermií sa v poslednej dobe niekoľkokrát zmenili a rôzne laboratóriá majú rôzne referenčné hodnoty. Je tiež potrebné vziať do úvahy sezónne výkyvy parametrov spermogramu, stav pacienta v súčasnosti, jeho psychologické charakteristiky.
Spermie na analýzu by sa mali odoberať počas sexuálnej abstinencie od 2 do 7 dní, pokiaľ možno bližšie k obvyklému rytmu sexuálnej aktivity. Vylúčte alkohol, neochorejte, nekúpte sa, nekúpte si horúci kúpeľ, buďte zdraví.
Ak sa parametre spermogramu pri vstupnom vyšetrení odchyľujú od normálu, je potrebné analýzu zopakovať po 2-6 týždňoch na potvrdenie diagnózy. Keďže spermatogenéza - proces tvorby zrelej spermatogenézy - trvá takmer 3 mesiace, akýkoľvek negatívny vplyv (horúčka, stres, otrava a pod.) môže v tomto čase ovplyvniť kvalitu spermií.
Je potrebné pochopiť, že aj pri veľkom počte spermií, dobrej pohyblivosti, nemusia plniť svoju hlavnú funkciu - oplodnenie vajíčka, pretože dochádza k „rozpadu“ na inej úrovni. Podľa najnovších údajov až 30 % prípadov mužskej neplodnosti sa vyskytuje s „normozoospermiou“ – formálne normálnym spermiogramom. Stanovenie mužského faktora neplodnosti si v tomto prípade vyžaduje použitie špeciálnych funkčných testov.
Základné testy na stanovenie diagnózy plodnosti alebo neplodnosti (môže alebo nemusí mať deti) sú v súčasnosti:
Spermogram - stanovenie objemu, viskozity, pH spermií, koncentrácie, motility a morfológie spermií, ich aglutinácia, počet leukocytov a množstvo ďalších parametrov.
MAR-test - test na prítomnosť protilátok proti spermiám (ASAT), vedúcich k imunitnej neplodnosti. Rozlišujte ASAT triedy IgG a triedy IgA, ktoré majú svoje vlastné charakteristiky.
Reaktívne formy kyslíka (ROS alebo ROS) v natívnom ejakuláte (semene) a na umytých spermiách. Zvýšenie produkcie reaktívnych foriem kyslíka v natívnom ejakuláte je citlivým markerom infekčno-zápalového procesu (citlivejším ako počet leukocytov). Produkcia ROS premytými spermiami je znakom oxidačného stresu v zárodočných bunkách, pri ktorom trpia aj chromozómy. Oxidačný stres spermií je príčinou nielen mužskej neplodnosti, ale aj potratu a vrodených anomálií u detí.
Tieto tri analýzy pomôžu pri stanovení správnej diagnózy, načrtnú spôsoby ďalšej liečby alebo určia potrebu ďalšieho výskumu v prípade zistených porušení.
Treba poznamenať, že každý deň prichádzajú mladí muži na odber spermiogramu a ani si neuvedomujú prítomnosť hnisavého procesu, keď je v semennej plazme veľké množstvo leukocytov. To môže viesť k ďalšiemu upchatiu vas deferens a v dôsledku toho spermie nevychádzajú, alebo čo je horšie, je narušený proces ich tvorby. Výsledkom je, že diagnostika mužskej plodnosti a infekčný proces v našom laboratóriu sú neoddeliteľné. Len v zafarbených náteroch možno vidieť a rozlíšiť leukocyty a nezrelé bunky spermatogenézy v rôznych štádiách vývoja. A ak sa zistí hnisavý proces, potom je možné okamžite vyšetriť spermie na sexuálne prenosné infekcie a urobiť bakteriálnu kultúru pre aeróby a anaeróby. Musíte tiež pochopiť, že zápal možno nájsť v sperme a sekrécia prostaty bude normálna a naopak, v sekréte prostaty môže byť zápal a v semene je norma. Sexuálne prenosné infekcie sa vyšetrujú zo zoškrabu z močovej trubice, pri ktorom pacient nesmie močiť dlhšie ako tri hodiny. Prichádzajú k nám muži rôzneho veku na testy na adekvátnu diagnózu prostatitídy.
Vzhľadom na životný štýl moderného mladého muža - skorá sexuálna aktivita, veľké množstvo sexuálnych partneriek, sex bez bariérovej antikoncepcie, sedavý spôsob života, stres - odporúčame profylaktické vyšetrenia nielen na infekcie, ale aj vyšetrenie spermiogramu na kontrolu pôrodu. zdravého potomstva.
